在蛋白質(zhì)的生物合成過程中，蛋白翻譯后修飾(PTM)通過在特定氨基酸殘基上添加修飾基團(tuán)，調(diào)控蛋白質(zhì)的理化特性，進(jìn)而影響其空間結(jié)構(gòu)、活性、細(xì)胞內(nèi)定位以及與其他蛋白質(zhì)的相互作用。PTM賦予單個蛋白質(zhì)多種功能，使其能夠響應(yīng)不同的生理需求，構(gòu)成了細(xì)胞信號傳遞的重要機(jī)制，因此也被稱為細(xì)胞的“自然語言”。蛋白翻譯后修飾包括：磷酸化、糖基化、甲基化、羥基化、脂酰化、羧基化等共價修飾。

蛋白質(zhì)磷酸化作為一種常見的PTM方式，在細(xì)胞內(nèi)具有重要地位，約30%以上的蛋白質(zhì)都存在磷酸化現(xiàn)象。鑒定磷酸化蛋白及其修飾位點(diǎn)對于深入研究相關(guān)信號通路的機(jī)制具有極其重要的意義。今天我們就來聊聊，如何用前沿技術(shù)解鎖磷酸化蛋白的研究密碼～

一、磷酸化蛋白：細(xì)胞信號的“開關(guān)大師”

蛋白質(zhì)的生物合成并非終點(diǎn)，翻譯后修飾才是賦予其“靈魂”的關(guān)鍵！

由蛋白激酶催化，將ATP/GTP的磷酸基團(tuán)“安裝”到蛋白的絲氨酸(Ser)、蘇氨酸(Thr)或酪氨酸(Tyr)殘基上，約30%以上的蛋白質(zhì)都有這種修飾。

圖1 蛋白磷酸化圖解

?激活蛋白質(zhì)功能（如酶活性）

?調(diào)控細(xì)胞增殖、遷移、分化等關(guān)鍵過程

?反映信號通路的激活狀態(tài)（堪稱通路的“信號燈”）

可以說，如果把細(xì)胞比作一臺精密儀器，那么，磷酸化蛋白就是儀器里的 “調(diào)節(jié)旋鈕”，輕輕一轉(zhuǎn)，就能觸發(fā)一系列復(fù)雜的生物反應(yīng)。

二、檢測難題：如何精準(zhǔn)捕捉“動態(tài)信號”

研究磷酸化蛋白的核心挑戰(zhàn)在于：

• 動態(tài)性：磷酸化狀態(tài)轉(zhuǎn)瞬即逝，需快速捕獲

• 低豐度：修飾位點(diǎn)可能僅占總蛋白的百分之幾

• 復(fù)雜性：不同細(xì)胞模型（貼壁/懸浮、原代/細(xì)胞系）需定制化方案

別擔(dān)心！瑞孚迪免洗檢測技術(shù) HTRF? 和 AlphaLISA? 為我們提供了高效解決方案！

三、免洗檢測黑科技：HTRF? vs. AlphaLISA?

• 操作簡便：無需洗滌步驟，3-4 步完成檢測，省時又省力；

• 高通量：兼容 96、384 、1536孔板，適合大規(guī)模篩選；

• 樣本友好：僅需微量樣本（珍貴原代細(xì)胞 / 腫瘤組織也能輕松檢測），節(jié)省樣品；

• 多重分析：可同時檢測磷酸化蛋白與總蛋白，直接計(jì)算修飾比例；

• 更好的實(shí)驗(yàn)性能：線性更寬、靈敏度更高；

• 應(yīng)用廣泛：樣品兼容性高。

圖2 HTRF技術(shù)原理圖解

圖3 AlphaLISA技術(shù)原理圖解

圖4 HTRF技術(shù)與AlphaLISA技術(shù)全流程操作對比

四、磷酸化熱門研究領(lǐng)域應(yīng)用

• 檢測靶點(diǎn)：ERK、AKT、ZAP70、SLP76、NF-κB等

• 應(yīng)用場景：免疫治療藥物篩選、T細(xì)胞活化機(jī)制研究

• 檢測靶點(diǎn)：JAK-STAT、BTK、IFN、TNF、IL-6等細(xì)胞因子

• 應(yīng)用場景：炎癥機(jī)制研究、自身抗體藥物開發(fā)

數(shù)據(jù)亮點(diǎn)：通過HTRF?/AlphaLISA?可直接獲取化合物IC50值和作用動力學(xué)曲線，助力機(jī)制與藥效雙重解析！

五、為什么選擇HTRF?和AlphaLISA?技術(shù)

?稀有樣本救星：僅需納克級蛋白，珍貴臨床樣本也能充分利用；

?實(shí)驗(yàn)效率UP：無需繁瑣洗滌，新手也能快速上手；

?結(jié)果更可靠：均一化檢測體系，減少人為操作誤差。

圖5 相關(guān)產(chǎn)品