激酶是生物體內一類重要的磷酸轉移酶，能夠催化磷酸基團由高能磷酸基團供體分子(如ATP)向特定底物分子轉移。激酶不但在新陳代謝、細胞信號傳導、蛋白質調控、細胞傳輸等過程中起著關鍵作用，而且在臨床診斷、藥物研發及疾病靶向治療等方面也發揮著重要作用。

?人類的激酶組：包含約518種蛋白激酶和20種脂質激酶，它們在細胞信號傳導通路中發揮著重要的調節作用。

?激酶的失調：可能會導致癌癥、神經退行性疾病、糖尿病等疾病。

?臨床進展：截至2024年9月，FDA已批準82種小分子蛋白激酶抑制劑上市。這些藥物覆蓋的蛋白激酶靶點僅代表518個蛋白激酶超家族的一小部分。

Revvity 三大激酶研究”神兵利器“??

1、Activity-based kinase assays（激酶活化檢測）

原理：激酶能夠將biotin-底物肽上的絲/蘇/酪氨酸磷酸化，這時加入Eu（供體）標記的識別磷酸化位點的抗體和XL665（受體）標記的鏈霉親和素，形成夾心復合物。使用320nm或340nm激光激發供體，供體會發射620nm發射光并通過FRET效應將能量轉移至受體，從而產生665nm處的發射光，且該665/620nm的信號與待測物濃度成正比。

圖1 HTRF技術流程

特點：低酶消耗（10ng/孔）；不限制ATP濃度；處理時間不到2小時；易于小型化至<4μl。

相關產品：高靈敏度的通用激酶檢測試劑盒，已被充分驗證用于200多種Ser/Thr和Tyr激酶。

圖2 通用激酶檢測試劑盒

原理：Eu標記的抗磷酸底物抗體與熒光基團ULight標記的底物的結合，當供體和受體分子非常接近時。在320或340nm激光激發下，來自Eu供體的能量轉移到ULight受體染料上，該染料進而產生665nm的熒光信號。熒光信號強度與ULight底物磷酸化水平成正比。

圖3 LANCE技術流程

特點：底物序列公開，單組分形式，底物類型更多。

圖4 部分LANCE產品，詳細內容見《LANCE Product List》

2、Kinase Binding assays（激酶結合檢測）

原理：使用標記有與GST/6HIS/生物素標記的激酶，可與Eu供體的特異性抗標簽抗體和標記有d2（受體）的紅色熒光tracer（激酶底物）結合。HTRF信號(665/620)將隨著tracer的加入而增加，并將根據得到的飽和結合曲線計算tracer與標記激酶的解離常數(Kd)。

圖5 激酶結合檢測流程

特點：專注于I、II和III型抑制劑篩選；適應具有挑戰性的情況（失活酶、突變酶、變構酶）；酶特異性；用于藥效學和選擇性研究的動力學結合檢測。

圖6 部分激酶結合檢測產品，詳細內容見《HTRF Product List》

3、Kinase-specific assays（激酶活化toolbox試劑）

原理：用Eu穴狀化合物標記的磷酸化Tyr、Ser/Thr特異性抗體作為供體以及鏈霉親和素偶聯的XL665/d2受體，供體和受體非常接近時產生FRET信號。

圖7 激酶活化toolbox試劑工作流程

特點：磷酸化特異性抗體；靈活的ATP濃度（無限制）；易于小型化，實現高通量；與肽或全長蛋白底物的相容性；多種包裝規格適用于高通量篩選；高Z'值，結果可靠且可重現。

圖8 部分激酶活化工具箱試劑，詳細內容見《HTRF Product List》

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