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pHSense? Eu探針是瑞孚迪推出的新一代鑭系銪穴狀化合物,專為內化研究而開發。它具有獨特的二維pH敏感性,當pH值為中性/堿性時,其620nm發射光信號非常低,而當pH值下降至酸性時,620nm發射光信號強度顯著上升。除此之外,620nm發射光的壽命也會隨pH值變化而改變,趨勢表現為隨著pH值下降,620nm發射光壽命延長,因此可實現時間分辨熒光(TRF)檢測。
胞外狀態(中性pH):pHSense? Eu探針位于細胞外,熒光信號極低(靜默)。
內化后(酸性內體/溶酶體):探針隨ADC/GPCR進入酸性環境,觸發強烈、長壽命的Eu熒光信號。

憑借獨特的二維pH靈敏度特性,pHSense? Eu探針可實現高靈敏、高檢測窗口的ADC/GPCR內化檢測。

以貼壁細胞為示例,步驟為:細胞過夜培養-棄培養基上清-加入經pHSense? Eu Fab anti-Human lgG標記的ADC-讀數,全程無需洗滌,支持實時監測。同時,基于酶標儀讀取數值的檢測形式,大大提高了實驗的效率和通量,且支持96&384-wells通量。

以Anti-Flag為例(適用于帶有Flag標簽的GPCR):
(1)細胞鋪板過夜→棄上清
(2)加入pHSense? Eu探針→孵育
(3)加入化合物(激動劑/拮抗劑)
(4)酶標儀讀數(可實時監測)

